Технологія білково-полісахаридних комплексів з антипротеолітичною активністю
Вантажиться...
Дата
2010
Автори
Назва журналу
Номер ISSN
Назва тому
Видавець
ОНАХТ
Анотація
Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата технічних наук за спеціальністю 03.00.20 – біотехнологія.
Дисертація присвячена розробці технології отримання білково-полісахаридного комплексу з антипротеолітичною активністю.
Значна увага в роботі приділяється всебічній характеристиці інгібітору трипсину, виділеного з насіння люцерни: характеристика складу та фізико-хімічних властивостей, визначення кінетичних параметрів гідролізу казеїну трипсином в присутності інгібітору з насіння люцерни; а також дослідженню умов його іммобілізації та характеристиці отриманого білково-полісахаридного комплексу.
Доведено доцільність використання білкової складової насіння люцерни як ефективного інгібітору трипсину в складі білково-полісахаридного комплексу. Інгібітор виділено зі знежиреного насіння люцерни екстракцією NaСl концентрацією 0,5 М в 0,1 М ацетатному буфері, рН 7,4. Визначено, що активною по відношенню до трипсину є альбумінова фракція насіння люцерни.
Встановлено, що за фізико-хімічними показниками білок-інгібітор є стійким до дії рН та температури середовища. Охарактеризовано його амінокислотний склад та форму білкової молекули. За специфічністю дії інгібітор є монофункціональним.
Здійснено іммобілізацію інгібітору трипсину насіння люцерни методом комплексоутворення з полісахаридом.
Надано харатеристику складу отриманого комплексу, встановлено, що шляхом іммобілізації можна досягти значного концентрування інгібітору. Іммобілізація не призводить до зміни механізму інгібування дії трипсину.
Розроблено та економічно обґрунтовано технологію отримання білково-полісахаридного комплексу з антипротеолітичною активністю. Технологія отримання комплексу включає такі основні етапи: екстракція інгібітору, його іммобілізація комплексоутворенням з полісахаридом, сушіння отриманого комплексу. Розроблено технічні умови та технологічну інструкцію на виробництво білково-полісахаридного комплексу. Реальність технології підтверджено результатами промислової апробації на біотехнологічному підприємстві. Показано можливість використання білково-полісахаридного комплексу у складі функціональних продуктів харчування.
Диссертация на соискание ученой степени кандидата технических наук по специальности 03.00.20 – биотехнология (технические науки). Диссертация посвящена разработке технологии получения белково-полисахаридного комплекса с антипротеолитической активностью. Значительное внимание в работе уделяется всесторонней характеристике ингибитора трипсина, выделенного из семян люцерны: изучению его состава и физико-химических свойств, определению кинетических параметров гидролиза казеина трипсином в присутствии получен-ного ингибитора; разработке условий его иммобилизации и характеристике полученного белково-полисахаридного комплекса. Установлено, что ингибитор трипсина семян люцерны имеет белковую природу. Белковую компоненту с антипротеолитической активностью выделяли из обезжиренных семян люцерны экстракцией NaСl концентрацией 0,5 М в 0,1 М ацетатном буфере, рН 7,4, гидромодуль 20. Ее фракционирование с помощью аммоний сульфата с последующей аффинной хроматографией на биоспецифическом сорбенте трипсин-сефароза 4В и дальнейшая характеристика ингибиторной активности полученных фракций позволили установить, что активной по отношению к трипсину является альбуминовая фракция. Изучены физико-химические свойства свободного ингибитора. Установлены рН- и термооптимумы его действия, при которых проявляется максимальная эффективность ингибирования. Доказано, что он является мономерным белком с изоэлектрической точкой в кислой области рН. Установлено, что ингибирование действия трипсина ингибитором происходит по нелинейному неполному конкурентному механизму. Проведена иммобилизация ингибитора трипсина методом комплексообразования с полисахаридом. Разработаны условия получения белково-полисахаридного комплекса с максимальным сохранением антипротеолитической активности. Реальность разработанной технологии подтверждена результатами ее промышленной апробации на биотехнологическом предприятии ООО НПО „Ариадна”. Результаты медико-биологических исследований показали, что введение белково-полисахаридного комплекса в пищевые рационы оказывает положительный эффект на показатели системы свертывания крови, способствует увеличению пониженной концентрации фибриногена. Рекомендованная суточная доза для человека составляет 2,5 г. Разработаны технические условия и технологическая инструкция на производство белково-полисахаридного комплекса. Показана возможность использования белково-полисахаридного комплекса в составе функциональных продуктов питания.
Dissertation on the reception of PhD of Engineering Sciences scientific degree by specialty 03.00.20 – biotechnology (technical sciences). Dissertation is devoted to reception technology development of protein-polysaccharide com-plex with antiproteolytic activity. Considerable attention is paid in full characterization of trypsin inhibitor isolated from the seeds of alfalfa: composition and phisico-chemical property characteristic, determination of casein hydrolysis kinetic parameters in the presence of trypsin inhibitor from alfalfa seed; study of the conditions of protein-polysaccharide complex immobilization and characterization. Prove the feasibility of using the protein component of alfalfa seeds as an effective trypsin inhibitor in the BPC. The inhibitor was isolated from defatted alfalfa seed by NaCl (concentration 0,5 M) in 0,1 M acetate buffer (pH 7,4) extraction. In order to determine the inhibitor composition and antiproteolytic activity of alfalfa seed individual protein components held protein component fractionation with ammonium sulfate. Determined that alfalfa seed albumin fraction had the antitrypsin activity. It was established that the physicochemical characteristics of protein-inhibitor are resistant to pH and temperature environment. Its amino acid composition and form of the protein molecule were also characterized. The inhibitor is monofunctional by the specificity. The immobilization of alfalfa seed trypsin inhibitor by the method of complexation with polysaccharides was carried out. Composition of the complex was characterized and found that with the help of immobilization significant concentration of the inhibitor from the extract can be achieved. The mechanism of trypsin inhibition did not change as a result of immoblization. The technology of protein-polysaccharide complex with antiproteolytic activity is developed and economically justified. The complex obtaining technology includes the following main stages: the protein inhibitor selection from the alfalfa seed extract and immobilization by complexforming with the polysaccharide, drying of obtained complex. The reality of technology is confirmed by the results of industrial testing at the biotechnological company, regulatory documentation is developed. The possibility of using protein-polysaccharide complex in the functional food is shown.
Диссертация на соискание ученой степени кандидата технических наук по специальности 03.00.20 – биотехнология (технические науки). Диссертация посвящена разработке технологии получения белково-полисахаридного комплекса с антипротеолитической активностью. Значительное внимание в работе уделяется всесторонней характеристике ингибитора трипсина, выделенного из семян люцерны: изучению его состава и физико-химических свойств, определению кинетических параметров гидролиза казеина трипсином в присутствии получен-ного ингибитора; разработке условий его иммобилизации и характеристике полученного белково-полисахаридного комплекса. Установлено, что ингибитор трипсина семян люцерны имеет белковую природу. Белковую компоненту с антипротеолитической активностью выделяли из обезжиренных семян люцерны экстракцией NaСl концентрацией 0,5 М в 0,1 М ацетатном буфере, рН 7,4, гидромодуль 20. Ее фракционирование с помощью аммоний сульфата с последующей аффинной хроматографией на биоспецифическом сорбенте трипсин-сефароза 4В и дальнейшая характеристика ингибиторной активности полученных фракций позволили установить, что активной по отношению к трипсину является альбуминовая фракция. Изучены физико-химические свойства свободного ингибитора. Установлены рН- и термооптимумы его действия, при которых проявляется максимальная эффективность ингибирования. Доказано, что он является мономерным белком с изоэлектрической точкой в кислой области рН. Установлено, что ингибирование действия трипсина ингибитором происходит по нелинейному неполному конкурентному механизму. Проведена иммобилизация ингибитора трипсина методом комплексообразования с полисахаридом. Разработаны условия получения белково-полисахаридного комплекса с максимальным сохранением антипротеолитической активности. Реальность разработанной технологии подтверждена результатами ее промышленной апробации на биотехнологическом предприятии ООО НПО „Ариадна”. Результаты медико-биологических исследований показали, что введение белково-полисахаридного комплекса в пищевые рационы оказывает положительный эффект на показатели системы свертывания крови, способствует увеличению пониженной концентрации фибриногена. Рекомендованная суточная доза для человека составляет 2,5 г. Разработаны технические условия и технологическая инструкция на производство белково-полисахаридного комплекса. Показана возможность использования белково-полисахаридного комплекса в составе функциональных продуктов питания.
Dissertation on the reception of PhD of Engineering Sciences scientific degree by specialty 03.00.20 – biotechnology (technical sciences). Dissertation is devoted to reception technology development of protein-polysaccharide com-plex with antiproteolytic activity. Considerable attention is paid in full characterization of trypsin inhibitor isolated from the seeds of alfalfa: composition and phisico-chemical property characteristic, determination of casein hydrolysis kinetic parameters in the presence of trypsin inhibitor from alfalfa seed; study of the conditions of protein-polysaccharide complex immobilization and characterization. Prove the feasibility of using the protein component of alfalfa seeds as an effective trypsin inhibitor in the BPC. The inhibitor was isolated from defatted alfalfa seed by NaCl (concentration 0,5 M) in 0,1 M acetate buffer (pH 7,4) extraction. In order to determine the inhibitor composition and antiproteolytic activity of alfalfa seed individual protein components held protein component fractionation with ammonium sulfate. Determined that alfalfa seed albumin fraction had the antitrypsin activity. It was established that the physicochemical characteristics of protein-inhibitor are resistant to pH and temperature environment. Its amino acid composition and form of the protein molecule were also characterized. The inhibitor is monofunctional by the specificity. The immobilization of alfalfa seed trypsin inhibitor by the method of complexation with polysaccharides was carried out. Composition of the complex was characterized and found that with the help of immobilization significant concentration of the inhibitor from the extract can be achieved. The mechanism of trypsin inhibition did not change as a result of immoblization. The technology of protein-polysaccharide complex with antiproteolytic activity is developed and economically justified. The complex obtaining technology includes the following main stages: the protein inhibitor selection from the alfalfa seed extract and immobilization by complexforming with the polysaccharide, drying of obtained complex. The reality of technology is confirmed by the results of industrial testing at the biotechnological company, regulatory documentation is developed. The possibility of using protein-polysaccharide complex in the functional food is shown.
Опис
Русєва, Я. П. Технологія білково-полісахаридних комплексів з антипротеолітичною активністю : автореф. дис. ... канд. техн. наук : спец. 03.00.20 "Біотехнологія" / Русєва Яна Петрівна ; наук. кер. Н. К. Черно ; Одес. нац. акад. харч. технологій. - Одеса : ОНАХТ, 2010. - 20 с.
Ключові слова
інгібітор трипсину, комплексоутворення, полісахарид, іммобілізація, ингибитор трипсина, комплексообразование, полисахарид, иммобилизация, trypsin inhibitor, complex, polysaccharide, immobilization